qPCR المجففة بالتبريد مقابل PCR الكاشف الرطب و LAMP لفحص مسببات أمراض الروبيان في المزرعة

لماذا يتم فحص الجمبري، وليس علاجه

تمتلك القشريات جهاز مناعة فطري فقط: لا توجد أجسام مضادة، ولا ذاكرة مناعية، ولا يوجد لقاح. البركة التي نجت من البقعة البيضاء العام الماضي ليست محمية هذا العام. وبالتالي فإن المكافحة تعني استبعاد اليرقات المصابة، والأمهات، والأعلاف الحية والناقلات، والكشف المبكر أثناء المحصول، وبالتالي فإن النتيجة الإيجابية تؤدي إلى حصاد جزئي أو تغيير في الإدارة قبل انهيار الحوض. كل واحد من هذه القرارات هو عبارة عن اختبار جزيئي، ومعظمها يجب أن يتم اتخاذه في مكان لا يوجد فيه مختبر.

مقارنة أربع طرق جزيئية

التقليدية والمتداخلة PCR. المرجع التاريخي لWSSV، IHHNV وEHP. تعطي جولتان من التضخيم والهلام حساسية عالية جدًا، لكن الجولة الثانية ذات الأنبوب المفتوح هي المصدر الكلاسيكي لتلوث الأمبليكون، ويستغرق التشغيل من ثلاث إلى أربع ساعات، والنتيجة هي شريط يمكن قراءته بالعين، ويتطلب مختبرًا مناسبًا بغرف منفصلة.

في الوقت الحقيقي (الكمي) PCR. الكشف عن مضان الأنبوب المغلق، والنتيجة في حوالي ساعة، وقيمة عتبة الدورة التي تعكس حمل مسببات الأمراض. أهمية التحميل في الجمبري: النتيجة الإيجابية الضعيفة في بركة التسمين والإيجابية القوية في مجموعة ما بعد اليرقات تتطلب إجراءات مختلفة. يسرد WOAH تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي جنبًا إلى جنب مع تفاعل البوليميراز المتسلسل المتداخل كطريقة موصى بها لفيروسات الجمبري الرئيسية.

LAMP والكيمياء متساوية الحرارة الأخرى. تسخين سريع وبسيط وقراءة مرئية. جذابة للاستخدام الميداني، ولكن التصميم التمهيدي لـ LAMP المكون من ستة أجهزة تمهيدية أمر صعب، كما أن تعدد الإرسال محدود، كما أن إنتاجية الأمبليكون العالية جدًا تجعل التلوث المرحل خطرًا مستمرًا في بيئة المزرعة. من الأفضل استخدامه كشاشة ذات هدف واحد مع فصل مادي صارم للخطوات.

مجفف بالتجميد (المجفف بالتجميد) في الوقت الحقيقي PCR. نفس كيمياء الكاشف الرطب qPCR، مع تجفيف المزيج الرئيسي والبادئات والمسبار في الأنبوب. يتم شحن المجموعة وتخزينها في درجة الحرارة المحيطة، ويضيف المشغل المستخلص والماء، ويدخل الأنبوب مباشرة إلى جهاز التحليل. فهو يزيل الفريزر، وسحب الإنزيمات، ومعظم فرص التلوث في خطوة واحدة.

ما هي تغييرات التجميد والتجفيف

سلسلة باردة. يجب أن يظل المزيج الرئيسي الرطب مجمداً من المصنع إلى المنصة ولا يتحمل سوى عدد قليل من دورات التجميد والذوبان. ولا يمكن لمزرعة تبعد ثلاث ساعات عن أقرب ثلاجة، أو مفرخ تنقطع طاقته أسبوعيا، أن يتحمله. يكون الأنبوب المجفف بالتجميد ثابتًا لعدة أشهر في درجة الحرارة المحيطة، لذلك يمكن وضع المجموعة على الرف في مكتب المفرخ.

خطوات عملية. باستخدام الكواشف الرطبة، يقوم المشغل بماصة المخزن المؤقت والإنزيم والبادئات والمسبار والقالب في كل أنبوب؛ كل عملية نقل هي فرصة للتلوث ومتطلبات التدريب. مع الأنبوب المجفف هناك نوعان من الإضافات، المستخلص والماء. وهذا هو السبب في أن فني المفرخ الذي حصل على تدريب لمدة يوم واحد يدير المفرخ بشكل موثوق.

تناسق. يحمل كل أنبوب في الكمية نفس كتلة الكاشف؛ لا يوجد اختلاف في الأنابيب بين عمليات التشغيل أو المشغلين، وهو ما يجعل قيم Ct قابلة للمقارنة من أسبوع لآخر في نفس البركة.

حساسية. تتوافق الكيمياء المجففة بالتجميد بشكل صحيح مع معادلها الرطب؛ يحمي التجفيف بالتجميد الإنزيم بدلاً من إتلافه. يتم ذكر حدود الكشف لخط تربية الأحياء المائية لكل مجموعة على صفحات المنتج.

خطة أخذ العينات التي تعني شيئا

إن الاختبار السلبي الذي تم إجراؤه على عشرة جمبري لا يقول سوى القليل عن بركة تحتوي على مليون. تعطي جداول عينات WOAH عدد الحيوانات اللازمة للكشف عن العامل الممرض عند معدل انتشار معين مع ثقة بنسبة 95 بالمائة في عدد كبير من السكان: 150 حيوانًا بنسبة انتشار 2 بالمائة، و60 حيوانًا بنسبة انتشار 5 بالمائة، و30 حيوانًا بنسبة انتشار 10 بالمائة. يتم تجميع مرحلة ما بعد اليرقات، لذا فإن اختبار الاعتماد على الدفعة عادة ما يكون عبارة عن عينة مجمعة من 150 حيوانًا، يتم تقسيمها أحيانًا إلى عدة مجموعات بحيث يمكن تحديد موقع النتيجة الإيجابية.

أثناء المحصول، يعد أخذ عينة مجمعة من 10 إلى 20 جمبريًا من صينية التغذية كل أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع، بالإضافة إلى الرواسب من منطقة التغذية بين المحاصيل، هو الحد الأدنى العملي. يتم اختبار الأمهات بشكل غير مميت من البراز أو خزعة ثنية الأرجل؛ يتم اختبار الأعلاف الحية مثل متعددات الأشواك دفعة واحدة قبل دخولها إلى المفرخ.

سير العمل في المزرعة، عينة للقرار

اجمع: ما بعد اليرقات، الأنسجة، الخياشيم، الكبد والبنكرياس، البراز، العلف أو الماء، في البركة أو المفرخ. التحضير: عازلة خالية من الاستخراج للأنسجة في خمس دقائق، أو مجموعة الخرز المغناطيسي للمياه والرواسب والدفعات. التشغيل: قم بإعادة ترطيب الأنبوب المجفف بالتجميد باستخدام المستخلص، ثم قم بتحميل المحلل المدمج المكون من 24 بئرًا، واحصل على النتيجة في حوالي 50 دقيقة مع ظهور الأشعة المقطعية على الشاشة. قرر: رفض الدفعة أو قبولها، أو إيقاف التغذية الحية أو الاستمرار فيها، أو الحصاد مبكرًا أو إكمال الدورة. تنتهي الحلقة بأكملها في فترة ما بعد الظهر، في الموقع، وهو الفرق بين برنامج الفحص الذي يتم تشغيله وبرنامج موجود على الورق.

التكلفة، في الوحدات الوحيدة التي تهم

يكلف الاختبار بضعة دولارات من الكاشف وساعة من وقت الفني. ويكلف المحصول المفقود التخزين والعلف والطاقة والموسم. يقوم المفرخ الذي يعتمد كل دفعة بواسطة qPCR ببيع اليرقات بسعر أعلى ويحافظ على عملائه؛ مزرعة تقوم بالفحص عند التخزين وتحول تفشي فيروس WSSV من خسارة كاملة إلى حصاد مبكر جزئي كل أسبوعين. المقارنة بين الطرق المذكورة أعلاه حقيقية، ولكن المقارنة بين الاختبار وليس الاختبار هي التي تقرر ما إذا كانت المزرعة لا تزال موجودة في العام المقبل.

تمت كتابته بواسطة فريق منتج Medicare Vet بناءً على بيانات الشركة المصنعة وتوجيهات WOAH والتحقق المنشور. ليس بديلاً عن المشورة البيطرية أو المخبرية في السوق الخاص بك.